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常用的培養(yǎng)基耗材和細(xì)胞接種量

我們常用的細(xì)胞培養(yǎng)容器有T25培養(yǎng)瓶、10cm培養(yǎng)皿、多孔板等，尤其是是多孔板，需要加多少培養(yǎng)基，很多同學(xué)不太確定，下面小編為大家整理了常見的培養(yǎng)容器的加液體積和建議接種量：耗材名稱規(guī)格培養(yǎng)面積(cm^2)加液體積（ml）建議接種量(×10^6）T25培養(yǎng)瓶底面積25cm^22551.25T75培養(yǎng)瓶底面積75cm^27515~303.75T175培養(yǎng)瓶底面積175cm^217535~408.756cm培養(yǎng)皿直徑6cm21.251.0610cm培養(yǎng)皿直徑10cm60.88~1...

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大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞該如何保存和應(yīng)用？

大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是哺乳動(dòng)物骨髓基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞亞群，具有多種分化潛能，可分化為骨、軟骨、脂肪、神經(jīng)和成肌細(xì)胞。它們不僅機(jī)械地支持骨髓中的造血干細(xì)胞(HSC)，而且還分泌多種生長(zhǎng)因子（如IL-6、IL-11、LIF、M-CSF和SCF）來支持造血。在骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)過程中，可在約24小時(shí)內(nèi)發(fā)生貼壁生長(zhǎng)。細(xì)胞呈圓形、梭形和三角形，生長(zhǎng)緩慢。液體交換后細(xì)胞增殖明顯，呈梭形為主，形態(tài)多樣。70%-80%可在10-14天融合，達(dá)到通過標(biāo)準(zhǔn)。傳代細(xì)胞形狀單一，有紡錘形或扁...

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普諾賽4月直播答疑：常見細(xì)胞污染類型及解決方法

在4月28日開播的“常見細(xì)胞污染類型及解決方法”課程中，有很多老師就細(xì)胞污染提出了疑問。我們篩選出部分代表性問題，并作了詳細(xì)解答。01Q：在細(xì)胞培養(yǎng)液中，有種可以游動(dòng)的蟲子是什么污染？A：是細(xì)菌污染。帶鞭毛的細(xì)菌就是會(huì)游動(dòng)的。02Q：有很多黑點(diǎn)，在原位顫抖，沒那么明顯的定向運(yùn)動(dòng)，是什么污染？A：細(xì)胞碎片、血清沉淀和有些細(xì)菌污染，都會(huì)在原位顫抖。前者是原地做不規(guī)律的布朗運(yùn)動(dòng)，細(xì)菌是原地轉(zhuǎn)動(dòng)，頻率會(huì)高很多。03Q：血清的絮狀物雜質(zhì)屬于正?，F(xiàn)象嗎？A：血清里面有一些大分子蛋白和一些...

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SH-SY5Y收貨常見問題及解決方案

常溫運(yùn)輸過程中，細(xì)胞不免受到震蕩和溫度變化的影響，出現(xiàn)皺縮、聚團(tuán)甚至脫落的現(xiàn)象。遇到這種情況，不用緊張，只要正確處理，細(xì)胞就能恢復(fù)正常生長(zhǎng)。收貨時(shí)皺縮常溫細(xì)胞收貨后，把細(xì)胞放進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)即可。如果4小時(shí)后細(xì)胞仍然沒有鋪展開，密度適中的前提下可以靜置過夜（過夜前倒出部分培養(yǎng)基，留5-10mL在瓶中，瓶蓋擰松）。收貨時(shí)聚團(tuán)常溫細(xì)胞收貨后，先把細(xì)胞放進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)以穩(wěn)定狀態(tài)，再進(jìn)行傳代。傳代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。收貨時(shí)脫落常...

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細(xì)胞培養(yǎng)中常見細(xì)胞污染類型及預(yù)防辦法

凡混入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對(duì)細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染，細(xì)胞污染不能*被消除，但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性。本文將簡(jiǎn)要介紹幾種常見的細(xì)胞污染類型及處理方法。常見污染類型細(xì)菌污染特征：大小在0.5~5μm，比動(dòng)物細(xì)胞小很多。多呈球狀或桿狀，形態(tài)規(guī)則，分布均勻；增殖速度快，一般污染后48~72小時(shí)爆發(fā)式增殖；營(yíng)養(yǎng)消耗快，培養(yǎng)基很快變黃，變渾濁；鏡下觀察有明顯的定向運(yùn)動(dòng)。處理方法：輕度污染可用10X雙抗清洗處理，重度污染建議消殺后丟棄。真菌污染特征：呈鏈球狀...

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大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)和傳代流程

體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞細(xì)胞周期有限；建議使用與procell配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基和正確的操作方法進(jìn)行培養(yǎng)，以保證細(xì)胞處于理想培養(yǎng)狀態(tài)。procell實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞采用胰蛋白酶消化、神經(jīng)元特異性培養(yǎng)基培養(yǎng)、篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制制備。細(xì)胞總數(shù)約為5×105個(gè)細(xì)胞/瓶。大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)和傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格按照無(wú)菌操作）：1、從原培養(yǎng)瓶中吸出培養(yǎng)基，用PBS緩沖液潤(rùn)濕細(xì)胞兩次，加入2-3ml025%胰蛋白酶消化細(xì)胞（注意消化時(shí)間，一般控制在1-2min內(nèi)）；2...

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收到293 [HEK-293]細(xì)胞后如何操作？

293[HEK-293]細(xì)胞是剪切過的人腺病毒5(Ad5)轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞形成的永生化細(xì)胞，293[HEK-293]細(xì)胞包含并表達(dá)轉(zhuǎn)染的Ad5基因。早期報(bào)道中指出，293[HEK-293]細(xì)胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是現(xiàn)在明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對(duì)Ad5的插入點(diǎn)的克隆測(cè)序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1-4344位線性核苷酸整合入293[HEK-293]細(xì)胞19號(hào)染色體(19q13.2)。293[HEK-293]細(xì)胞為人類腺病毒載體擴(kuò)增的宿主...

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直播答疑 | 普諾賽3月直播：細(xì)胞系由來及鑒定問題

在普諾賽3月30日開播的細(xì)胞培養(yǎng)直播課堂中，有很多同學(xué)提出各種疑問。我們篩選出具有代表性的問題，并作了詳細(xì)解答。01動(dòng)物細(xì)胞怎么鑒定？要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的以及細(xì)胞類型進(jìn)行選擇。如果是人源細(xì)胞系，并且有文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)庫(kù)公布對(duì)應(yīng)細(xì)胞信息，則進(jìn)行STR鑒定即可；如果使非人源的細(xì)胞系，可以進(jìn)行種屬鑒定，并且附加一個(gè)研究方向相關(guān)的指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證，部分小鼠細(xì)胞也可以做STR鑒定，但目前數(shù)據(jù)庫(kù)不*，很多都沒有匹配數(shù)據(jù)。對(duì)于原代細(xì)胞，如果能夠確保取材無(wú)誤，僅進(jìn)行特異性指標(biāo)方面的檢測(cè)就可以了，方法可采用...

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